乳双歧杆菌U9是一株具有优良益生功能的乳杆菌。为了保证U9菌株活性，为工业化益生菌制剂生产提供稳定菌种，利用液氮深冷方式对U9菌株进行冷冻保藏。以冷冻存活率为评价指标，对冷冻保护剂种类进行筛选，并对保护剂配方进行正交试验优化。结果表明，甘油、海藻糖、脱脂乳粉及维生素C4种保护剂能对乳双歧杆菌U9起到良好的保护作用;正交试验优化确定的保护剂配方为甘油2%、海藻糖7.5%、脱脂乳粉7.5%、维生素C 0.1%，菌体冷冻后存活率达到94%。
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乳双歧杆菌是人体肠道中常见的益生菌，也是世界上被广泛研究的益生菌菌种之一，在维护人体健康中扮演重要角色。据统计，有300多种科学出版物都对乳双歧杆菌功能特性进行了描述，其中130多种报道涉及其人体临床研究。大量报道表明，乳双歧杆菌的保健作用已经在许多胃肠健康和免疫功能临床研究中得到了验证。目前，人们已经把乳双歧杆菌制备成了发酵乳制品的直投发酵剂、膳食补充剂以及药用制剂等。
在乳双歧杆菌工业化使用过程中，菌种活力的保持与工业化生产紧密相关。传统的保菌方式主要是采用真空冷冻干燥的方法，但存在设备成本较高、菌种存活率低等问题。
因此，探究一种更为简便的保菌方式显得尤为重要。液氮深冷保菌方式因其实验操作简便、成本较低、菌种活力高等优势，越发广泛地应用到菌种保藏中。有研究采用3%甘油、5%海藻糖、5%果糖、8%脱脂乳、0.05%维生素C、0.05%L-谷氨酸(L-GLU)作为保护剂配方，对长双歧杆菌起到良好保护作用，保证在深冷条件下存活率接近100%。针对不同菌株研究特异性冷冻保护剂是菌株深冷保藏的关键。
冷冻保护剂分为渗透型、非渗透型、半渗透型和抗氧化型4种，不同类型保护剂的保护机制也不同。
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液氮深冷冷冻技术，能耗小，安全性高，生产成本低，能较好地提升菌种的存活率，为菌种的保藏提供了更有效便捷的方式。冷冻保藏效果的关键在于冷冻保护剂的选择，通过对保护剂种类进行筛选，确定了甘油、海藻糖、脱脂乳粉和维生素C4种保护剂，它们能够对乳双歧杆菌U9在液氮中的冷冻保藏起到良好的保护作用，并借助正交试验及验证试验对保护剂浓度进行优化，确定保护剂配方为2%甘油、7.5%海藻糖、7.5%脱脂乳粉、0.1%维生素C。利用优化后的保护剂配方对乳双歧杆菌U9进行冻干保护，存活率可达94%，为乳双歧杆菌U9在工业化生产中的应用提供理论依据。
